د فلوروسینس فلټر د فلوروسینس مایکروسکوپ کې لازمي برخه ده. یو عادي سیسټم درې بنسټیز فلټرونه لري: د جوش فلټر، د اخراج فلټر او ډیکرویک عکس. دوی عموما په مکعب کې بسته شوي ترڅو ګروپ په مایکروسکوپ کې یوځای داخل شي.
د فلوروسینس فلټر څنګه کار کوي؟
د هڅونې فلټر
د هڅونې فلټرونه د یو ځانګړي طول موج رڼا لیږدوي او نور موجونه بندوي. دوی د فلټر په جوړولو سره د مختلف رنګونو تولید لپاره کارول کیدی شي ترڅو یوازې یو رنګ ته اجازه ورکړي. د جوش فلټرونه په دوه اصلي ډولونو کې راځي - اوږد پاس فلټرونه او د بینډ پاس فلټرونه. Exciter معمولا د بانډ پاس فلټر دی چې یوازې د فلوروفور لخوا جذب شوي طول موجونه تیریږي ، پدې توګه د فلوروسینس نورو سرچینو هڅونه کموي او د فلوروسینس اخراج بانډ کې د جوش رڼا بندوي. لکه څنګه چې په انځور کې د نیلي کرښې لخوا ښودل شوي، BP 460-495 دی، پدې معنی چې دا یوازې د 460-495nm فلوروسینس څخه تیریږي.
دا د فلوروسینس مایکروسکوپ د روښانتیا لارې کې ځای په ځای شوی او د فلوروفور د هڅونې سلسلې پرته د رڼا سرچینې ټولې طول موجونه فلټر کوي. د فلټر لږترلږه لیږد د عکسونو روښانتیا او روښانهتیا حکم کوي. د هر ډول جوش فلټر لپاره لږترلږه 40٪ لیږد سپارښتنه کیږي چې لیږد په مثالي توګه> 85٪ وي. د اکسیټیشن فلټر بینډ ویت باید په بشپړ ډول د فلوروفور د هڅونې حد کې وي لکه د فلټر مرکزي څپې (CWL) څومره چې ممکنه وي د فلوروفور د لوړ هڅونې څپې ته نږدې وي. د جوش فلټر نظری کثافت (OD) د شالید عکس تیاره حکم کوي؛ OD یوه اندازه ده چې فلټر د لیږد رینج یا بینډ ویت څخه بهر د څپې اوږدوالی څومره ښه بلاک کوي. لږترلږه د 3.0 OD سپارښتنه کیږي مګر د 6.0 یا ډیر OD غوره دی.
د اخراج فلټر
د اخراج فلټرونه د دې هدف لپاره خدمت کوي چې د نمونې څخه مطلوب فلوروسینس ته اجازه ورکړي ترڅو کشف کونکي ته ورسیږي. دوی لنډ طول موجونه بندوي او د اوږدې طول موج لپاره لوړ لیږد لري. د فلټر ډول هم د یو شمیر سره تړلی دی، د بیلګې په توګه په شکل کې BA510IF (د مداخلې خنډ فلټر)، دا ډیزاین د خپل اعظمي لیږد 50٪ کې د موج اوږدوالی ته اشاره کوي.
د جوش فلټرونو لپاره ورته وړاندیزونه د اخراج فلټرونو لپاره ریښتیني دي: لږترلږه لیږد ، بینډ ویت ، OD ، او CWL. د مثالي CWL، لږترلږه لیږد او OD ترکیب سره د اخراج فلټر د خورا ژور احتمالي بلاک کولو سره خورا روښانه ممکن عکسونه چمتو کوي ، او د اخراج د ټیټ سیګنالونو کشف یقیني کوي.
Dichroic Mirror
ډیکرویک عکس د 45 درجې زاویه کې د اکسیټیشن فلټر او اخراج فلټر ترمینځ ځای په ځای شوی او د فلوروفور په لور د جوش سیګنال منعکس کوي پداسې حال کې چې کشف کونکي ته د اخراج سیګنال لیږدوي. مثالي ډیکرویک فلټرونه او بیم سپلیټرونه د اعظمي انعکاس او اعظمي لیږد ترمینځ تیز لیږدونه لري ، د 95٪ انعکاس سره د جوش فلټر د بینډ ویت لپاره او د اخراج فلټر د بنډ ویت لپاره> 90٪ لیږد سره. فلټر د فلوروفور د تقاطع طول موج (λ) سره په ذهن کې وټاکئ، ترڅو د کوڅې رڼا کمه کړي او د فلوروسینټ عکس سیګنال څخه د شور تناسب اعظمي کړي.
په دې ارقام کې ډیکرویک عکس DM505 دی، نو ځکه نومول شوی ځکه چې 505 نانومیټره د دې عکس لپاره د اعظمي لیږد 50٪ کې د څپې اوږدوالی دی. د دې عکس لپاره د لیږد وکر د 505 nm څخه پورته لوړ لیږد ښیي، د 505 نانومیټر کیڼ اړخ ته په لیږد کې ډیر کمښت، او د 505 نانومیټر کیڼ اړخ ته اعظمي انعکاس څرګندوي مګر بیا هم ممکن د 505 nm څخه ښکته لیږد ولري.
د اوږد پاس او بانډ پاس فلټرونو ترمینځ څه توپیر دی؟
د فلوروسینس فلټرونه په دوه ډوله ویشل کیدی شي: اوږد پاس (LP) او بانډ پاس (BP).
اوږد پاس فلټرونه اوږد موجونه لیږدوي او لنډ یې بندوي. د کټ آن طول موج د لوړ لیږد 50٪ ارزښت دی ، او د کټ آن پورته ټول موجونه د اوږد پاس فلټرونو لخوا لیږدول کیږي. دوی په مکرر ډول په ډیکرویک عکسونو او د اخراج فلټرونو کې کارول کیږي. د لانګ پاس فلټرونه باید وکارول شي کله چې غوښتنلیک د اعظمي اخراج راټولولو ته اړتیا ولري او کله چې د سپیکٹرل تبعیض مطلوب یا اړین نه وي ، کوم چې په عمومي ډول د هغو تحقیقاتو لپاره قضیه ده چې په نمونو کې د شالید آټو فلوروسینس نسبتا ټیټ کچې سره یو واحد اخراجونکي ډولونه رامینځته کوي.
د بانډ پاس فلټرونه یوازې د ځانګړي طول موج بډ لیږدوي، او نور یې بندوي. دوی د فلوروفور اخراج سپیکٹرم یوازې قوي برخې ته د لیږدولو اجازه ورکولو سره کراسټالک کموي ، د آټو فلوروسینس شور کموي او پدې توګه د لوړ شالید آټو فلوروسینس نمونو کې د سیګنال څخه شور تناسب ته وده ورکوي ، کوم چې اوږد پاس فلټرونه وړاندیز نشي کولی.
څو ډوله فلوروسینس فلټر سیټونه BestScope چمتو کولی شي؟
د فلټرونو ځینې عام ډولونه شامل دي نیلي، شنه او الټرا وایلیټ فلټرونه. لکه څنګه چې په جدول کې ښودل شوي.
| د فلټر ترتیب | د هڅونې فلټر | Dichroic Mirror | د خنډ فلټر | د LED څراغ څراغ اوږدوالی | غوښتنلیک |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | FITC: د فلوروسینټ انټي باډي میتود · اسیدین نارنج: DNA، RNA اورامین: تیوبرکل باسیلوس · EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | روډامین، TRITC: د فلوروسینټ انټي باډي میتود پروپیډیم آیوډیډ: DNA · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · د اتومات فلوروسینس مشاهده DAPI: د DNA داغ · Hoechest 332528, 33342: د کروموزوم داغ لپاره کارول کیږي |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | کیټیکولامین 5-هایډروکسی ټریپټامین Tetracycline: کنکال، غاښونه |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · Cy5 · الیکسا فلور 633، الیکسا فلور 647 |
د فلټر سیټونه چې د فلوروسینس استملاکونو کې کارول کیږي د فلوروسینس غوښتنلیکونو کې کارول شوي لوی طول موجونو شاوخوا ډیزاین شوي ، کوم چې د ډیری کارول شوي فلوروفورونو شاوخوا دی. د دې دلیل لپاره ، دوی د فلوروفور په نوم هم نومول شوي چې دوی د عکس اخیستنې لپاره ټاکل شوي ، لکه DAPI (نیلي) ، FITC (شین) یا TRITC (سور) فلټر کیوبونه.
| د فلټر ترتیب | د هڅونې فلټر | Dichroic Mirror | د خنډ فلټر | د LED څراغ څراغ اوږدوالی |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| ټیکساس سور | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
تاسو څنګه د فلوروسینس فلټر غوره کوئ؟
1. د فلوروسینس فلټر غوره کولو اصول دا دي چې د فلوروسینس / اخراج ر lightا د امکان تر حده پورې د عکس العمل پای څخه تیریږي ، او په ورته وخت کې په بشپړ ډول د جوش څراغ بندوي ، ترڅو د لوړ سیګنال څخه تر شور تناسب ترلاسه کړي. په ځانګړي توګه د ملټي فوټون هڅونې او ټول داخلي انعکاس مایکروسکوپ پلي کولو لپاره ، ضعیف شور به د عکس اخیستنې اغیزې کې د لوی مداخلې لامل شي ، نو د شور تناسب ته د سیګنال اړتیا لوړه ده.
2. د فلوروفور د جوش او اخراج طیف پیژنئ. د فلوروسینس فلټر سیټ رامینځته کولو لپاره چې د تور شالید سره د لوړ کیفیت ، لوړ برعکس عکس رامینځته کوي ، د جوش او اخراج فلټرونه باید په هغو سیمو کې د لږترلږه پاسبنډ ریپل سره لوړ لیږد ترلاسه کړي چې د فلوروفور د جوش چوکۍ یا اخراج سره ورته وي.
3. د فلوروسینس فلټرونو پایښت په پام کې ونیسئ. دا فلټرونه باید د شدید ر lightا سرچینو لپاره ناپاک وي چې الټرا وایلیټ (UV) ر lightا رامینځته کوي کوم چې د "سوځیدو" لامل کیدی شي ، په ځانګړي توګه د اکسیټ فلټر ځکه چې دا د روښانه سرچینې بشپړ شدت سره مخ کیږي.
د مختلف فلوروسینټ نمونې انځورونه
سرچینې په انټرنیټ کې راټول شوي او تنظیم شوي، او یوازې د زده کړې او اړیکو لپاره کارول کیږي. که کوم سرغړونې شتون ولري، مهرباني وکړئ د حذف کولو لپاره موږ سره اړیکه ونیسئ.
د پوسټ وخت: دسمبر 09-2022